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受體菌感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的制備

日期:2025-07-18 23:04
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摘要:


受體菌感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的制備 
 
普通地,新制備的感覺(jué)態(tài)細(xì)胞48h后轉(zhuǎn)化速率減低,15d后失去效力。因?yàn)檫@個(gè),感覺(jué)態(tài)細(xì)胞不可以保留太久,4℃保留一周,但-80℃可保留1年。用玻璃管分裝可防止反反復(fù)復(fù)凍熔,損因感觸而悲傷受態(tài)細(xì)胞。

當(dāng)球菌處于容易借鑒外源DNA的狀況時(shí),即為感覺(jué)態(tài),而用理化手眼使球菌處于感覺(jué)態(tài)的操作為致敏過(guò)程。感覺(jué)態(tài)細(xì)胞制備是重組基因能否成功實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一個(gè)關(guān)緊的技術(shù)環(huán)節(jié)。本嘗試是經(jīng)過(guò)鈣離子來(lái)引誘使之變成感覺(jué)態(tài)細(xì)胞。

材料和辦法

1. 材料:結(jié)腸桿菌

2. 攝譜儀:

離心思,恒溫?fù)u床,恒溫水浴,超凈辦公臺(tái),冷柜

3. 試藥

LB營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),0.1M MgCl2,3mM氯化六氮合高鈷

TFB:10Mm MES(pH6.3)

45Mm MnCl2

10Mm CaCl2

10Mm KCl

操作步驟

結(jié)腸桿菌在LB營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)平板上劃線培育12-16鐘頭,挑取單菌落于LB營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)搖瓶培育結(jié)腸桿菌到對(duì)數(shù)期。取1ml培育物7000rpm,離心3min,使聚在一起菌體。再重復(fù)一次。冰浴安放。用預(yù)冷的氯化鎂懸浮菌體7000rpm離心3min。使聚在一起菌體,冰浴安放。用預(yù)冷的氯化鈣懸浮菌體,冰浴15min, 7000rpm離心3min。使聚在一起菌體,冰浴安放。參加200μl預(yù)冷的氯化鈣(或TFB),安放于冰浴,即得感覺(jué)態(tài)細(xì)胞,此細(xì)胞可現(xiàn)用,也可施行下步操作。將懸液分裝于無(wú)菌離心管中,投入液氮,而后儲(chǔ)于-70℃保留。

 
 
 

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